产品货号:
YTC1501
中文名称:
SgeI限制性内切酶
英文名称:
SgeI Endonuclease
产品规格:
50μL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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SgeI可切割在单链或双链DNA上含有5-甲基胞嘧啶的DNA靶标。SgeI限制性内切酶可识别m5CNNG(9/13)^位点,并于37℃下在其独特的缓冲液中的切割效果最佳。为确保一致的性能,该酶储存缓冲液中包含预混合BSA,其可增强酶的稳定性,并与DNA制剂中可能存在的污染物相结合。
识别序列 | 同裂酶 | 酶切温度 | 失活条件 | 甲基化干扰? |
5'-m5CNNG(N)9^-3' 3'-GNNC(N)13^-5' | 无 | 37℃ | 80℃加热20min | 有时有干扰 |
在1×SgeI Buffer条件下,1μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+)在50μL反应体系中37℃孵育1h,不断增加酶量,直至酶切产物DNA带型不随着酶量的增加而发生变化,此时酶量定义为1U。
- 核酸内切酶残留检测:将3U SgeI与超螺旋质粒DNA在37℃温育4h,通过DNA电泳检测质粒无变化。
- 核酸外切酶残留检测:将5U SgeI与双链DNA底物在37℃温育1h,通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。
组分 | 规格 |
SgeI限制性内切酶 | 50μL |
10×SgeI Buffer | 1mL |
保存:-20℃,有效期2年。
- 内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
- 底物至少需要2个SgeI识别序列才能有效酶切。
- 甲基化DNA完全酶切取决于SgeI的识别位点的数量,另外由于识别位点酶切产生的DNA产物会促进SgeI的非特异性酶切,因此,建议酶切时优化SgeI酶量用于酶切反应。
- 不含核酸酶的超纯水推荐选购百奥莱博的无菌无酶超纯水(货号:YT998)。
- 如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。
- 同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性,遇到可能存在甲基化干扰问题时,可以尝试同裂酶。
- SgeI内切酶识别位点的甲基化影响请参考下表:
Dam Dcm CpG EcoKI EcoBI 无影响 总是切割被Dcm甲基转移酶甲基化的DNA 切割与CpG甲基化序列重叠的靶点 无影响 无影响
- 单酶切时可以参考如下反应体系,在冰浴上进行操作。
成分 用量 超纯水 至20μL 10×SgeI Buffer 2μL 底物DNA xμL(0.5~2μg) SgeI 0.2~1μL 总体积 20μL 37℃温育 1小时
注:反应体系可以按比例放大或缩小。反应时间不建议超过1h。- 参考上表依次加入各种液体后,用移液器轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋混合),然后瞬时离心以沉降液体至管底。
- 37℃温育1h。酶切反应时优先推荐使用水浴,反应温度通常更加恒定一些。
- 80℃温育20min即可使酶失活并停止反应(可选)。
- 参考上表依次加入各种液体后,用移液器轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋混合),然后瞬时离心以沉降液体至管底。
- 双或多酶切时可以在参考上表单酶切反应体系设置的基础上,参考如下原则设置反应体系。
- 每种内切酶的用量为1μL,并根据需要适当扩大反应体系;
- 所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10;
- 如果所用的几种内切酶的最适反应温度不同,应先从最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
- 每种内切酶的用量为1μL,并根据需要适当扩大反应体系;
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