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SgeI可切割在单链或双链DNA上含有5-甲基胞嘧啶的DNA靶标。SgeI限制性内切酶可识别m5CNNG(9/13)^位点，并于37℃下在其独特的缓冲液中的切割效果最佳。为确保一致的性能，该酶储存缓冲液中包含预混合BSA，其可增强酶的稳定性，并与DNA制剂中可能存在的污染物相结合。

• 核酸内切酶残留检测：将3U SgeI与超螺旋质粒DNA在37℃温育4h，通过DNA电泳检测质粒无变化。
  
• 核酸外切酶残留检测：将5U SgeI与双链DNA底物在37℃温育1h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。

• 内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
  
• 底物至少需要2个SgeI识别序列才能有效酶切。
  
• 甲基化DNA完全酶切取决于SgeI的识别位点的数量，另外由于识别位点酶切产生的DNA产物会促进SgeI的非特异性酶切，因此，建议酶切时优化SgeI酶量用于酶切反应。
  
• 不含核酸酶的超纯水推荐选购百奥莱博的无菌无酶超纯水(货号：YT998)。
  
• 如果发现预期的酶切位点不能切开，请确认是否存在甲基化干扰问题。
  
• 同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性，遇到可能存在甲基化干扰问题时，可以尝试同裂酶。
  
• SgeI内切酶识别位点的甲基化影响请参考下表：

  Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
  无影响	总是切割被Dcm甲基转移酶甲基化的DNA	切割与CpG甲基化序列重叠的靶点	无影响	无影响

• 单酶切时可以参考如下反应体系，在冰浴上进行操作。
  

  成分	用量
  超纯水	至20μL
  10×SgeI Buffer	2μL
  底物DNA	xμL(0.5～2μg)
  SgeI	0.2～1μL
  总体积	20μL
  37℃温育	1小时

  
  注：反应体系可以按比例放大或缩小。反应时间不建议超过1h。
  
  • 参考上表依次加入各种液体后，用移液器轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋混合)，然后瞬时离心以沉降液体至管底。
    
  • 37℃温育1h。酶切反应时优先推荐使用水浴，反应温度通常更加恒定一些。
    
  • 80℃温育20min即可使酶失活并停止反应(可选)。
• 双或多酶切时可以在参考上表单酶切反应体系设置的基础上，参考如下原则设置反应体系。
  
  • 每种内切酶的用量为1μL，并根据需要适当扩大反应体系；
    
  • 所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
    
  • 如果所用的几种内切酶的最适反应温度不同，应先从最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。